PAXgene RNA採血管からの高精製度・高効率でのRNA抽出

Agencourt RNAdvance Bloodは、独自の核酸精製法SPRI(Solid Phase Reversible Immobilization)技術を利用した、磁性ビーズによるPAXgene RNA採血管からのRNA抽出・精製キットです。 遠心やフィルトレーションを行うことなく、高い精製度と高収率でRNAの精製を行うことが可能です。また、自動分注機Biomek を用いた自動化にも適しており、大量サンプルの処理に最適です。

PAXgeneはPreAnalytiX GmbHの登録商標です。

Agencourt RNAdvance Blood

特長

  • 高精製度・高収率
  • 高い精製度により、様々な下流のアプリケーションに対応
  • マニュアルによる1サンプルの処理から、自動分注機Biomekを用いた自動化システムによる大量処理まで幅広く対応
  • Biomek FXP/NXPを用いれば96ウェルプレート1枚のサンプルを約3.5時間で処理可能

高い収量と精製度

Agencourt RNAdvance Bloodは、高い収率と精製度を実現します (図1)。400uLのサンプルから約700ngのRNAを回収可能です。これはPAXgene RNA採血管のサンプル全てを使用すれば、17μgのRNAを回収可能な収量です。

図1. RNAdvance Bloodにより抽出したRNAの収量
PAXgene RNA採血管からのRNA抽出・精製を行った結果。RNAdvance Blood は400μLのサンプルから、PAXgene Blood RNA kitは9.4mLのサンプルからの抽出。RNA量はA260/280により測定、n=24。

ゲノムDNAの混入を最小限に

抽出されたRNAへのゲノムDNAの混入は一部のアッセイに影響を与えることがあります。RNAdvance BloodではDNaseによりRNAのみを回収することが可能であり、より確実にゲノムDNAを排除することが可能です。図2ではゲノムDNAのコンタミネーションが無いことを確認するために、下記の実験を行いました。まずRNAdvance Bloodキットにより抽出・精製したRNAを、逆転写酵素を含むものと含まないものの2つの系に分け、反応しました。続いて、β-アクチン遺伝子を増幅するプライマーセットによりPCR反応を行いました。逆転写酵素を含まないサンプルからは、β-アクチン遺伝子の増幅が見られない (図2、右) ことから、RNAにはゲノムDNAのコンタミネーションが無いことが確認できます。また、逆転写酵素を加えた後にPCR反応を行った結果 (図2、左) は、得られたβ-アクチン遺伝子の増幅はcDNAによるもののみであることを示しています。

図2. RNAdvance Bloodにより抽出したRNA溶液中に対するゲノムDNAの混入の有無の確認
PAXgene RNA採血管から得たRNAを用い、400 bpのβ-アクチン遺伝子を増幅するプライマーセットにより、35サイクルでPCR反応を行った。左図:レーン1~9はRNAに逆転写酵素を加えたもの、レーン10は鋳型DNAを含むコントロール、レーン11はRNAを含まずに逆転写酵素を加えたコントロール。右図:レーン1~9は、RNAに逆転写酵素を加えなかったもの。レーン10は鋳型DNAを含むコントロール、レーン11はRNA、逆転写酵素ともに加えなかったコントロール。

大量処理も可能な効率の良いプロセス

RNAdvance Bloodは磁性ビーズを用いており、96ウェルベースでの大量処理にも適しています。
ベックマン・コールターの自動分注機Biomekシリーズによる自動化も可能です。Biomek FXPを用いれば、96サンプルからのRNA抽出を、約3時間30分で処理可能です。
Biomekによる自動化の詳細

実験ステップ

  1. Lysis Bufferを添加、撹拌
  2. Proteinase Kを添加、反応
  3. Bind 1 Bufferを添加、RNAを磁気ビーズに結合
  4. マグネットプレートを用いて、溶媒を廃棄、洗浄
  5. DNase I でDNA分解
  6. Bind 2 Bufferを添加、DNAを磁気ビーズに結合
  7. マグネットプレートを用いて、溶媒を廃棄、洗浄
  8. 溶出

仕様

内容構成

  • Lysis Buffer
  • Bind 1 Buffer
  • Bind 2 Buffer
  • Wash Buffer
  • Proteinase K
  • Proteinase K Buffer

マニュアル・SDSなど

アプリケーションノート

Order Information

製品名 サイズ 製品番号 価格(税別)
Agencourt RNAdvance Blood 50 Preps A35603 ¥56,000
384 Preps A35604 ¥360,000

記載の製品は研究用です。

マグネットアクセサリ

使用時に必要です。

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